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PHP中表单checkbox参数传递问题.pdf
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高拷贝数重组毕赤酵母的构建对人凝血因子VⅡ蛋白在毕赤酵母中表.pdf
目的：构建不同高拷贝数重组表达质粒并转入酵母，以比较研究人凝血因子vⅡ(FvⅡ)蛋白在毕赤酵母(Pichia pastoris)中表达时，表达单元拷贝数与表达量之间的关系。
方法：通过对单拷贝表达质粒进行改造，将表达单元(5´-AOX-FVⅡ-TT-3´)重复导入载体，构建2至5个表达单元串联的高拷贝重组菌体，探讨表达单元拷贝数与表达量之间的关系。并进行了15L发酵中试培养，比较不同拷贝数酵母在发酵罐培养中的表达情况。对发酵产物进行超滤浓缩，用一期法初步测定活性。
结果: 构建获得pPIC9K-FVⅡ表达单元串联的2至5个不同拷贝数的高拷贝重组酵母。摇瓶表达显示，随着拷贝数的增加，FvⅡ表达量呈抛物线状增加。在15L发酵罐中，5个拷贝数的重组体不如单拷贝重组体生长旺盛，并发生了溶菌现象。发酵产物经超滤脱盐浓缩后的活性测定表明表达的重组FVⅡ有生物活性，并且活性随蛋白浓度增高而呈递增趋势。
结论: 构建含高拷贝数表达质粒的工程菌可提高毕赤酵母FVⅡ表达量，此为获取低成本有活性的重组FVⅡ提供了一条新的途径。
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